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淤血肠神经组织MAP2、CAD和S100表达及意义

2017-11-09 22:00:09    作者:admin    www.5alw.com

【摘要】    目的 建立兔肠淤血模型,观察微管相关蛋白(MAP?2)、S?100蛋白(S?100)与组织蛋白酶D(CAD)在肠淤血模型肠神经组织中的表达,探讨其在肠淤血发生、发展中的作用。方法 利用夹闭门静脉的方法制作肠淤血动物模型,应用免疫组织化学的方法观察正常组、对照组、实验组中小肠壁肠神经组织中MAP?2、S?100、CAD的表达情况。结果 实验组MAP?2、S?100的表达高于正常组及对照组;CAD的表达低于正常组及对照组,差别有统计学意义(t=2.256~5.542,P<0.05、0.01)。结论 肠淤血状态导致的肠缺血、低氧以及代谢产物和毒素的堆积,可导致肠道神经元数量减少;肠淤血造成的缺血、低氧状态也激发了神经纤维的再生。 
【关键词】  肠淤血 微管相关蛋白质类 S100蛋白质类 组织蛋白酶D 兔
  [ABSTRACT] Objective To study the expression of MAP?2,S?100 and CAD in nerve tissue of a congestive intestine model and discuss their impact on  its development. Methods The model was made by clamping the portal vein, the expression of MAP?2,S?100 and CAD in nerve tissue of small?intestine wall in the model, normal control and experimental group was detected by immunohistochemistry technique. Results In the experimental, the expression of MAP?2 and S?100 was significantly higher than that of the control and normal groups, while CAD was lower than that of the two groups (t=2.256-5.542;P<0.05,0.01).Conclusion Intestinal congestion results in ischemia of intestine, hypoxia, and accumulation of metabolic product and toxin, leading to decrease of amount of neuron and,on the other hand, intestinal congestion stimulates regeneration of neve fibers.
    
  [KEY WORDS] Congestion of intestine; Microtubule?associated proteins; S100 proteins; Cathepsin D; Rabbits
    
  胃肠运动主要受两方面因素的调节:一是神经系统,二是体液因素[1]。胃肠道运动功能(如小肠的分节运动以及蠕动)主要受局部的肠神经系统调节,而对中枢神经系统具有相对独立性。肠神经系统的缺乏或功能异常,则导致胃肠道功能紊乱[2]。有证据显示,在肠道感染状态下,肠神经元可表现为神经元数目和神经元内化学递质的改变、神经元兴奋性的增加等[3]。而肠淤血是众多肠道疾病共有的病理学改变,可造成肠道运动功能、肠道微循环、肠黏膜屏障等方面的损害[4]。本实验应用免疫组织化学的方法,观察肠神经组织中微管相关蛋白(MAP?2)、组织蛋白酶D(CAD)和S?100蛋白(S?100)表达的变化,以期阐明肠淤血状态下肠神经元的改变,为临床相关疾病的诊断、治疗提供依据。
  1  材料和方法
  1.1  实验材料   
  健康纯种新西兰大白兔30只,随机分为实验组、对照组及正常组,每组10只。采用100 g/L水合氯醛(0.3 mL/100 g体质量)腹腔注射麻醉。依次切开皮肤、皮下、腹膜,暴露门静脉,以显微手术用无损伤动脉夹夹闭门静脉入肝处。无菌生理盐水纱布覆盖切口,旁照灯照射保暖。1 h后松开动脉夹恢复血流,依次关闭切口。对照组进行同样操作但不夹闭门静脉。正常组不作任何处理。12 h后处死动物,取距胃幽门部15 cm处小肠组织1 cm×1 cm。
  1.2  免疫组化染色
    
  标本经40 g/L甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,切片厚度为4 μm。行MAP?2、CAD、S?100 免疫组化染色。鼠抗兔微管蛋白抗体、鼠抗兔CAD抗体、鼠抗兔S?100抗体、羊抗兔二抗免疫组化试剂盒及DAB 显色剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。观察正常组、对照组及实验组肠壁中神经节细胞、神经胶质细胞及神经纤维的染色结果。
  1.3  统计学处理
    
  用Sampl?PCI图像分析系统进行半定量分析,对所得数据进行t检验。 
  2  结果
  2.1  MAP?2免疫组化染色
    
  各组中均可见阳性细胞,但正常组阳性细胞染色相对较浅;对照组和正常组差别不大;实验组可见大量染色阳性细胞。用Sampl?PCI图像分析系统对免疫阳性细胞进行半定量分析,正常组平均吸光度值为0.069±0.027,对照组为0.075±0.064,实验组为0.158±0.043,实验组平均吸光度值高于对照组和正常组,差异均有显著性(t=3.404、5.542,P<0.01)。
  2.2  S?100免疫组化染色
    
  在正常组中可见到在阳性染色的神经丛中有一种特征性形态,表现为深染的神经丛中有细胞状“空白区”。正常组、对照组染色阳性细胞的差别不大。但在实验组中这种现象很少见到,而表现为密集S?100阳性染色的神经丛中鲜有“空白区”出现。用Sampl?PCI图像分析系统对免疫阳性细胞进行半定量分析,正常组平均吸光度值为0.117±0.043,对照组为0.121±0.043,实验组为0.158±0.029,实验组S?100表达明显增强,与正常组和对照组比较差异均有显著性(t=2.500、2.256,P<0.05)。
  2.3  CAD免疫组化染色
    
  三组肠壁肌间与黏膜下层神经丛中均可见CAD阳性染色的细胞,肌间神经丛内神经节细胞着色强于黏膜下神经丛。实验组中的阳性细胞数要少于正常组和对照组;而正常组和对照组之间差别不大。用Sampl?PCI图像分析系统对免疫阳性细胞进行半定量分析,正常组平均吸光度值为0.096±0.030,对照组为0.094±0.030,实验组为0.060±0.035,实验组平均吸光度值低于对照组和正常组,差异均有显著性(t=2.332、2.469,P<0.05)。
  3  讨论
  3.1  肠神经系统对胃肠功能的作用
    
  胃肠道壁内神经系统是具有调节控制胃肠道功能的独立整合系统。它在结构和功能上不同于交感和副交感神经系统,而与中枢神经系统相类似,但仍属于自主神经系统的一个组成部分。肠神经系统内的神经元是多种多样的,具体可分为运动神经元、分泌神经元、感受神经元、中间神经元等;肠神经系统的神经元还可以合成多种脑肠肽,在胃肠功能的调节上发挥着不同的作用[8]。目前已有多项实验证明,肠神经系统神经元的数量异常或功能改变是肠疾病中胃肠功能改变的主要病理机制。如食管失弛缓症,是由于病人下食管括约肌含血管活性肠肽(VIP)神经元显著减少或缺乏所致,其血中VIP浓度也较低[9];先天性巨结肠病人结肠和直肠病变是由于肠VIP神经元的缺乏所致。

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