我爱论文网 >> 论文中心 >> PPARγ激动剂对大鼠胰腺缺血再灌注损伤作用及机制

PPARγ激动剂对大鼠胰腺缺血再灌注损伤作用及机制

2017-11-10 13:00:03    作者:admin    www.5alw.com

                       作者:王明玉 孟凯 李华德

【摘要】  目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)激动剂吡格列酮在大鼠胰腺缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法 建立大鼠胰腺缺血再灌注损伤模型,将40只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注损伤组(IR组)、吡格列酮预处理组(PGZ组)及吡格列酮+GW9662预处理组(PGZ+GW9662组),每组10只。再灌注后,取静脉血检测血淀粉酶、脂肪酶水平,取胰腺组织检测核因子?κB (NF?κB)、Bcl?2蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)表达。结果 与S组相比,其余3组血淀粉酶和脂肪酶水平、胰腺组织NF?κB活性均明显升高,SOD、Bcl?2表达则明显降低(F=21.72~356.76,q=4.37~10.13,P<0.05);与IR组相比,PGZ组血淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织NF?κB活性均明显降低,SOD、Bcl?2表达明显升高(q=3.45~8.72,P<0.05);而PGZ+GW9662组与IR组相比差异无统计学意义(q=0.16~1.13,P>0.05);与PGZ组相比,PGZ+GW9662 组血淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织NF?κB活性表达明显增加,SOD、Bcl?2表达明显降低(q=3.77~8.98,P<0.05)。结论 PPARγ激动剂吡格列酮可能是通过PPARγ途径上调SOD的活性、Bcl?2表达及下调NF?κB表达,对胰腺缺血再灌注损伤起保护作用。 
【关键词】  过氧化物酶体增殖物激活受体;再灌注损伤;胰腺;吡格列酮
 [ABSTRACT] Objective To investigate the effect of pioglitazone?a peroxisome proliferator?activated receptor γ (PPARγ) activator?on pancreatic ischemia?reperfusion injury and its mechanism in the rat. Methods A model of ischemia?reperfusion injury (IRI) in pancreas was established in 40 SD rats, which were evenly randomized to four groups as sham?operation group (group A), ischemia?reperfusion group (group B), pioglitazone group (group C) and pioglitazone+GW9662 group (group D). Serum diastase and lipase levels were determined, the pancreas tissue was removed for NF?κB, Bcl?2 and SOD detections. Results Compared with group A, the serum levels of diastase, lipase and the activities of NF?κB in the other three groups were significantly increased, and the expressions of Bcl?2 and SOD decreased (F=21.72-356.76,q=4.37-10.13,P<0.05); Compared with group B, the diastase, lipase and the activities of NF?κB in group C were significantly decreased, and Bcl?2 and SOD increased (q=3.45-8.72,P<0.05); Compared with group C, the diastase, lipase, and the activities of NF?κB in group D were significantly increased, and Bcl?2 and SOD in group D decreased (q=3.77-8.98,P<0.05). Conclusion PPARγ activator?pioglitazone?protects against IRI in pancreas is probably through up?regulating Bcl?2 and SOD and down?regulating NF?κB activation.
  [KEY WORDS] Peroxisome proliferator?activated receptors; Reperfusion injury; Pancreas; Pioglitazone
  过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ) 是由配体激活的核转录因子, 广泛存在于心肌、肝脏等组织器官中,其与配体结合后,在基因转录水平发挥转录调控作用[1,2]。近年来研究显示,PPARγ和缺血性病理损伤的关系密切, PPARγ激动剂预处理对心肌、肝脏及休克时组织器官的缺血再灌注损伤有保护作用[3]。目前,有关PPARγ激动剂在胰腺缺血再灌注损伤中是否有保护作用的研究尚少见报道。本实验通过静脉注射特异性PPARγ激动剂吡格列酮,观察其对大鼠胰腺缺血再灌注损伤保护作用,并探讨其可能的机制。
  1 材料与方法
  1.1 材料
  健康雄性SD大鼠40只,体质量200~250 g(山东大学实验动物中心);吡格列酮和GW9662(Cayman公司, 美国);抗鼠Bcl?2(晶美生物公司)、抗鼠核因子?κB(NF?κB) P65单克隆抗体(Santa Cruz BioTech公司, 美国);超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物工程技术研究所)、7170A全自动生化分析仪(日立公司,日本)。
  1.2 胰腺缺血再灌注模型的建立术前实验动物禁食12 h,自由进水,用4 g/L氯胺酮(50 mg/kg)腹腔麻醉。腹正中切口,分离胃脾韧带,结扎脾门血管,夹持脾脏,将胃翻向大鼠右侧,暴露膈肌与左肾动脉之间的腹主动脉,游离腹腔干至脾动脉,用无创动脉夹夹闭脾动脉,造成胰腺体尾缺血模型,30 min后松开动脉夹进行再灌注,时间均为2 h。再灌注完成后心房取血2~3 mL,并迅速切取缺血胰腺组织,将标本置于-75 ℃低温冰箱保存。假手术组以相同的手术方法切开显露腹主动脉干及脾动脉,但不夹闭血管。
  1.3 动物分组及处理
  健康SD大鼠40只,按随机数字表法分为4组,每组10只。假手术组 (S组):术前30 min经股静脉分支缓慢注射生理盐水40 mL/kg;缺血再灌注组(IR组):断流前30 min经股静脉分支缓慢注射生理盐水40 mL/kg;吡格列酮预处理组(PGZ组):断流前30 min经股静脉分支缓慢注射吡格列酮1 mg/kg;吡格列酮+GW9662预处理组(PGZ+GW9662组):断流前30 min经股静脉分支缓慢注射GW96621 mg/kg,5 min后静脉注射吡格列酮1 mg/kg。
  1.4 检测指标
  1.4.1 血清淀粉酶、脂肪酶测定 在预定的时间点取心房血,应用全自动生化分析仪测定血清淀粉酶、脂肪酶水平。
  1.4.2 胰腺组织NF?κB活性及Bcl?2水平测定采用Western blot法。将0.05 g胰腺组织在低渗缓冲液中匀浆,分离提纯核蛋白溶液。电泳分离蛋白质,将分离好的PAGE胶转印至硝酸纤维素膜上,再用50 g/L脱脂牛奶封闭1 h,在4 ℃条件下依次用NF?κB P65、Bcl?2和β?actin抗体溶液(1∶1 000)孵育 过夜,再置入含二抗的溶液中继续孵育1 h,最后用碱性磷酸酶标记显色,拍照,凝胶成像分析系统(捷达凝胶成像系统3.3)对所得区带进行扫描,经β?actin校正后,比较各组的积分吸光度值。
  1.4.3 胰腺组织SOD活性测定 采用黄嘌呤氧化酶法,具体操作参照试剂盒说明书进行。
  1.5 统计学处理
  实验数据以均数±标准差表示。采用SPSS 12. 0及PPMS 1.5[4]统计软件进行统计,多样本均数间比较用单因素方差分析(One?Way ANOVA)。
  2 结 果
  与S组相比,其余3组血淀粉酶和脂肪酶水平、胰腺组织NF?κB活性均明显升高,SOD、Bcl?2表达明显降低(F=21.72~356.76,q=4.37~10.13,P<0.05);与IR组相比,PGZ组血淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织NF?κB活性均明显降低,SOD活性、Bcl?2表达明均显升高(q=3.45~8.72,P<0.05);而PGZ+GW9662组与IR组相比差异无显著意义(q=0.16~1.13,P>0.05);与PGZ组相比,PGZ+GW9662 组血淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织NF?κB活性明显增加,SOD、Bcl?2表达明显降低(q=3.77~8.98,P<0.05)。见表1。表1 各组大鼠相关检测指标比较
  3 讨 论
  缺血再灌注损伤是造成胰腺移植后各种并发症的主要原因之一,如移植术后早期胰腺炎[5]、移植胰腺原发无功能、移植术后胰岛细胞功能不良,这些都大大降低胰腺移植的效果。研究表明,缺血再灌注导致胰腺微循环障碍和无复流现象发生[6];引起胰腺组织嗜中性粒细胞(PMNs)浸润、黏附和激活,氧自由基和前炎性细胞因子的释放[7];并激活胰酶,导致胰腺的自我消化,诱发急性胰腺炎[8]。吡格列酮属于噻唑烷二酮(TZD)衍生物,是一种PPARγ特异性激动剂,其激活PPARγ后调控多种基因转录,从而参与脂肪和糖的代谢、单核?巨噬细胞激活、炎症反应、肿瘤细胞分化和凋亡等生理病理过程。有研究结果显示,吡格列酮有抗脑、心肌缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡作用[9,10]。GW9662(2?chloro?5?ni?trobenzanilide)是一种PPARγ特异性阻断剂,能逆转上述作用[11]。本研究结果显示,吡格列酮能减轻胰腺缺血再灌注损伤,而GW9662 能够阻断吡格列酮的保护作用。提示在胰腺缺血再灌注过程中,吡格列酮可以减轻胰腺缺血再灌注损伤。
  研究结果显示,缺血再灌注损伤可导致细胞凋亡[12]。Bcl?2家族是最主要的细胞凋亡调控基因之一,表达产物Bcl?2蛋白是一种跨膜蛋白,在抗凋亡中发挥重要作用,可阻断氧自由基、辐射、缺血低氧、抗肿瘤药物等刺激引起的细胞凋亡[13]。Bcl?2家族包括两类基因:一类是抗凋亡基因,如Bcl?2;另一类是促凋亡基因,如bax。Bcl?2/bax表达产物比值可反映它们在细胞凋亡中的作用,若比值升高,则抑制细胞凋亡;反之,则促进细胞凋亡[14]。本实验结果显示,经吡格列酮预处理后胰腺内Bcl?2 蛋白表达增加,而GW9662 则能逆转吡格列酮的上述效应。提示PPARγ激活后通过上调Bcl?2而发挥抗凋亡作用。

我爱论文网(www.5alw.com)是国内顶尖的代写毕业论文,硕士论文代写,职称论文发表的服务机构,我们致力于为广大客户提供最优秀的毕业论文代写和职称论文发表服务!
版权声明
    凡本站稿件类型为“原创”的所有文字、图片和音视频等稿件,均为我爱论文网版权所有,未经本站协议授权,任何媒体、网站及个人均不得转载或以其它方式发表,违者必究。如需转载,请注明出处。