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两种肾炎湿热证血尿模型的比较

2018-05-27 12:00:04    作者:admin    www.5alw.com

【摘要】  目的 探讨价格低廉、中医证型突出的肾炎血尿模型的建立方法。方法 将Wistar大鼠在口服并定时尾静脉注射牛血清白蛋白的基础上,分别施以葡萄菌肠毒素B或高糖高脂等湿热因素造模,利用生物学方法、光学显微镜等手段对两种造模方法进行对比观察。结果 两种造模方法均成功制成血尿明显、病理改变典型的系膜增殖性肾炎大鼠模型,加强湿热因素能加重水肿及尿血、尿素氮等水平。结论 湿热模型组总体症状表现更符合临床中医湿热证型,是价格低廉且病理改变典型的肾炎血尿动物模型。

【关键词】  肾炎; 血尿; 模型; 湿热证; 系膜增殖性肾炎; 动物,实验

    【Abstract】  Objective  To explore the establishment of successful nephritis hematuria rat model at low prices.Methods  Based on intragastric administration and regular tail vein injection of bovine serum albumin (BSA),hematuria in nephritis was produced by a tail intravenous injection of enterotoxin B (SEB) or damp?heat factors in rats respectively.Then,biological methods and light microscope were employed for comparative observations on the two ways of inducing nephritis hematuria.Results  Both of the two methods succeeded in duplicating mesangial proliferative glomerulonephritis (MsPGN) with obvious hematuria and typical pathological changes in rats.An enhanced damp?heat factor could raise rat weight,aggravating edema and hematuria,as well as elevating the levels of blood urea nitrogen.Conclusion  The damp?heat group shows less effectiveness in the extent of hematuria and proteinuria than the control group with SEB injection;however,it’s more accord with the “Damp?heat Syndromes” in clinical TCM,thus proved to be an economical animal model of nephritis hematuria with typical pathological changes.

    【Key words】  Nephritis;  Hematuria;  Model;  Damp?heat syndrome;  MsPGN;  Animal,experiment

    血尿为儿科各类肾脏病中最常见的症状,国内儿童发生率较高,近年研究提示,孤立性血尿并非良性过程,随着慢性肾脏病概念的提出,人们对其严重性更为关注,但目前尚无有效的治疗方法[1]。

    笔者在前期临床研究中发现,小儿血尿多表现为湿热证,予清热利湿之中药复方“金水清”能明显减轻血尿症状[2]。为进一步探求中药治疗本病的作用机制,研制符合中医医理的肾炎血尿模型尤为重要。现就两种血尿模型的比较结果报道如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料  (1)6周龄SPF级雄性Wistar大鼠40只,体质量(150±20)g,购自湖北省实验动物中心;高糖高脂饲料由湖北省中医院制剂科生产。(2)牛血清白蛋白(BSA),ROCHE购买;葡萄球菌肠毒素B(SEB),军事科学院微生物研究所提供。(3)SHH?500GS人工气候箱(重庆市永生实验仪器厂);YC?D205超声波加湿器(北京亚都科技股份有限公司)。

    1.2  方法  40只大鼠经适应性饲养1周后,查尿红细胞、蛋白全部为阴性,随机分为4组,每组10只。

    1.2.1  对照模型组参照胡海翔等[3]的方法。隔日灌胃含0.1% BSA的酸化水2 mL,第6周时定期尾静脉注射1% BSA缓冲液10 mg/(kg?d),连续3次,8周时尾静脉注射SEB 0.4 mg/(kg?d),连续3周。观察至第12周末。

    1.2.2  湿热模型Ⅰ组  造模方法与对照模型组相似,但第4周时,参照吴仕九等[4]报道,增加饮食和环境因素。将大鼠置于恒温恒湿箱中(温度35 ℃,相对湿度95%),温度和湿度逐步提升,每日不超过5 ℃,120 h后移至自然环境。入箱前10 d和入箱期间,都以高糖高脂饲料喂养。第8周不用SEB,而是注射等量生理盐水。观察至第12周末。

    1.2.3  湿热模型Ⅱ组  造模方法与湿热模型Ⅰ组相同,但在第5周,再次增加饮食和环境因素,置于造模箱中共240 h。

    1.2.4  正常组  隔日口服酸化水2 mL,定期尾静脉注射生理盐水,至第12周末。

    1.3  指标的观察及检测  定时观察、记录大鼠体温(肛温)、活动状态、食量、饮水、体质量、粪便、毛发等一般情况;用代谢笼每周末留尿检测各组大鼠12 h尿红细胞数,并于0,12周末留尿测24 h尿蛋白定量。

    至12周末,禁食12 h后,麻醉处死,无菌摘除眼球取血,测血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿素氮和肌酐;迅速打开腹腔取出肾组织,做光镜检测。

    1.4  统计学分析  采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析,各组实验数据以±s表示,统计分析用单因素方差分析和t检验,检验差异有统计学意义设为P<0.05。

    2  结果

    2.1  一般情况  与正常组相比,造模动物均出现程度不等发热、嗜卧、行动呆滞、耸毛、饮水少、食欲不振、肛门红肿、大便烂、尿少色深、舌质暗红,部分大鼠出现眼眵、舌苔稍白腻、腹泻、皮下水肿等表现。3~5 d后,各组上述表现基本恢复,但湿热模型Ⅱ组皮下水肿、尿少色深等情况持续到实验结束。且湿热模型大鼠体质量、入箱前24 h与出箱后24 h体温净增值较正常组、对照模型组显著增加,见表1;提示增加环境与饮食湿热因素后,能出现更明显的发热、水肿等表现。

    2.2  尿素氮、血肌酐水平测定  12周末,与正常组比较,造模动物尿素氮、肌酐水平均有增高,对照模型组与湿热模型组之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

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