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大鼠非酒精性脂肪肝实验模型的建立

2018-06-05 12:00:16    作者:admin    www.5alw.com

                   作者:熊丽,易鹏,余琼华,周隽敏,骆传佳

【摘要】  目的 建立一个非酒精性脂肪肝动物模型。方法 40只大鼠随机分为对照组和模型组。模型组给予高脂饮食(15%猪油,8%蛋黄粉,2%胆固醇),在造模第4周、8周、18周分别取模型组动物各2只,观察其病理模型形成情况。对照组给予正常饮食。结果 造模过程中,模型组动物造模后体重增长较正常对照组迅速,至8周时,体重较正常组平均重21%,18周时模型动物体重及肝指数均较正常组显著增加(P<0.01),在病理方面,造模组4周后大鼠出现了轻度的肝脂肪变,造模8周大鼠多呈中度脂肪变。造模18周大鼠呈中重度的大泡性脂肪变。结论 高脂高胆固醇饮食是一种有效的脂肪肝模型制作方法。 

【关键词】  非酒精性脂肪性肝炎;动物模型;动物实验 

    [Abstract]  Objective  To duplicate the animal steatohepatitis model with fat?rich and chol?rich diet.Methods  40 SD male rats were randomly divided into 2 groups.The models were induced with fat?rich diet which was compose of 15 percent lard oil,8 percent egg powder and 2 percent cholesterol.The normal control group were fed with normal diet.At the 4,8 and 18 week,two rats of the steatohepatitis model group sacrificed for pathological observation each time.Results  During the experimentation,the weight of the model group increased quicklier than the normal control group.After the rats had been induced for the model with fat?rich diet for 8 weeks,the weight of the model group was heavier averagely by 21 percent than the normal control group.At the end of experimentation,the weight and the rate of liver weight of the model group were higher than the normal control group(P<0.01).The livers presented the pathology of hepatocyte lower steatosis at the 4 week and medium fatty degeneration at 8 week in rats of model group.At 18 week of fat?rich diet feeding,all model rats developed steatohepatitis severely.Conclusions  Fat?rich and chol?rich diet is available in duplicating the animal steatohepatitis model.

    [Key words]  nonalcoholic steatohepatitis;animal model;animal experiment

    目前,非酒精性脂肪性肝炎的发病率为1.2%~4.8%[1],随着人民物质生活的改善,非酒精性脂肪性肝病的发病率将逐年上升。在某些地区脂肪肝已超过病毒性肝炎而成为第一大肝病。非酒精性脂肪性肝炎已成为隐源性肝酶升高的最常见原因,也几乎是至少60%的病因迄今不明的肝硬化病例的基础病因[2]。本课题采用了高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎的动物模型,观察非酒精性脂肪性肝炎的动物模型的病理变化特点。

    1  材料与方法

    1.1  材料  雄性SD大鼠40只,体重200~220 g,清洁级,华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,动物合格证号为SCXK(鄂)2004-0007,胆固醇购于上海康成生物试剂有限公司,批号2006103,猪油、鸡蛋黄自备。

    1.2  动物分组及处理  SD大鼠40只,随机分为两组各20只。除正常对照组外,全部给予高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型。高脂饮食由普通饲料加15%猪油,8%蛋黄粉,2%胆固醇组成。在造模第4周、8周、18周分别处死模型组动物各2只,观察其病理模型形成情况。第18周末将大鼠用2%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射,麻醉后下腔静脉取血,将血标本离心后用于血脂检测;取肝左叶,用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋切片,作肝组织病理学观察。

    1.3  观察指标及检测

    1.3.1  一般项目  观察动物的体重、饮食、毛发、活动情况、肝/体重比等。

    1.3.2  血脂检测  于动物处死前,采取各组动物血液分离血清,采用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪检测,采用贝克曼生化试剂盒。

    1.3.3  病理学观察  取新鲜肝组织左叶,用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋5μm切片,HE染色作肝组织病理学观察,了解肝组织脂肪变性、炎症活动程度。

    1.4  统计学方法  计量资料用SPSS 11.0统计软件进行统计分析。等级资料用秩和检验。计数资料用χ2检验。

    2  结果

    2.1  动物的一般情况  实验期间正常组动物精力充沛,灵活好动,饮食正常,皮毛整洁,体重缓慢增加;模型组饮食量大,嗜睡,毛色偏黄,个体较大,体重增长较正常组较快,至8周时,模型组各动物体重较正常组平均重21%,有不同程度的精神萎靡,活动减少,皮毛凌乱。

    2.2  体重和肝指数  两组大鼠体重和肝指数情况见表1。表1  各组动物体重、肝指数变化情况注:模型组较正常组体重及肝指数均显著增加(P<0.01)

    2.3  血脂  两组大鼠TG、TC、HDL?C、LDL?C的影响,见表2。表2  实验结束时各组动物血脂情况注:模型组与正常组相比,TG、TC、HDL?C、LDL?C差异有显著性(P<0.01)

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